紫外可見分光光度計的分類及校正標準

1. 單光束分光光度計

其光路示意圖如前面的圖13.14所示，經單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進行吸光度的測定。這種簡易型分光光度計結構簡單，操作方便，維修容易，適用于常規分析。國產722型、751 型、724型、英國SP500型以及Backman DU－8型等均屬于此類光度計。

2. 雙光束分光光度計

其光路示意于圖13.17。經單色器分光后經反射鏡（M1）分解為強度相等的兩束光，一束通過參比池，另一束通過樣品池，光度計能自動比較兩束光的強度，此比值即為試樣的透射比，經對數變換將它轉換成吸光度并作為波長的函數記錄下來。雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品池，還能自動消除光源強度變化所引起的誤差。這類儀器有國產710型、730型、740型等。



3. 雙波長分光光度計

其基本光路如圖13.18所示。由同一光源發出的光被分成兩束，分別經過兩個單色器，得到兩束不同波長（λ1和 λ2）的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經過光電倍增管和電子控制系統，zui后由顯示器顯示出兩個波長處的吸光度差值 。對于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計，能獲得導數光譜。通過光學系統轉換，使雙波長分光光度計能很方便的轉化為單波長工作方式。如果能在λ1和λ2處分別記錄吸光度隨時間變化的曲線，還能進行化學反應動力學研究。

光度計的校正

通常在實驗室工作中，驗收新儀器或儀器使用過一段時間后都要進行波長校正和吸光度校正。建議采用下述的較為簡便和實用的方法來進行校正。
鐠玻璃或鈥玻璃都有若干特征的吸收峰，可用來校正分光光度計的波長標尺，前者用于可見光區，后者則對紫外和可見光區都適用。
可用K2CrO4標準溶液來校正吸光度標度。將0.0400gK2CrO4溶解于1L的0.05mol·L－1KOH溶液中，在1cm光程的吸收池中，在25oC時用不同波長測得的吸光度值列于表13.5 。